Corning康寧澳洲胎牛血清使用中常會(huì)碰到的問(wèn)題是什么

 　　我們?cè)趹?yīng)用Corning康寧澳洲胎牛血清的過(guò)程中，常會(huì)遇到一些問(wèn)題，該如何應(yīng)對(duì)呢。我們根據(jù)經(jīng)驗(yàn)整理如下：

　　1、如何儲(chǔ)存和解凍Corning康寧澳洲胎牛血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

　　將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

　　長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清，并避免反復(fù)凍融。

　　建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)(由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10 %， 必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形)，再放回冷凍。

　　2、Corning康寧澳洲胎牛血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

　　沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀會(huì)自然消失。

　　3、如何避免Corning康寧澳洲胎牛血清中產(chǎn)生沉淀?

　　按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

　　(1)解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

　　(2)血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

　　(3)勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

　　(4)勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

　　(5)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。

　　(6)若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。

　　4、胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?

　　一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。

　　如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒(méi)有任何變化，那么黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：

　　(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老，破碎的細(xì)胞殘骸;

　　(2)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱?yīng)用離心、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn);

　　(3)血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果;

　　(4)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng);

　　(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。