PicoPLEX WGA Kit 單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒技術(shù)原理

介紹

胚胎植入前遺傳學(xué)篩查（PGS）可利用微陣列方法或NGS來(lái)開(kāi)展，目前IVF機(jī)構(gòu)zui常用的是微陣列比較基因組雜交（array CGH）。

植入前基因篩查和診斷（PGS，PGD）是指體外受精（IVF）過(guò)程中所做的胚胎或卵母細(xì)胞測(cè)試，以便選擇沒(méi)有染色體變異和家族遺傳病等位基因的胚胎，提高懷孕成功率，減少特定遺傳病的傳遞風(fēng)險(xiǎn)。微陣列分析是IVF機(jī)構(gòu)zui常用的PGS技術(shù)，這類試劑盒有好幾種都嵌合了PicoPLEX技術(shù)，被廣泛使用。包括Illumina’s 24Sure 微陣列, Perkin Elmer’s KaryoLite BoBs developed for PGS和 Oxford Gene Technology’s CytoSure™ 微陣列。不過(guò)實(shí)驗(yàn)室研究的趨向是使用低覆蓋度（low pass）的新一代測(cè)序（NGS）替代微陣列，PicoPLEX DNA-seq正好滿足這種需求。

應(yīng)用PicoPLEX的PGS技術(shù)：吸取單個(gè)胚胎細(xì)胞——細(xì)胞裂解，DNA擴(kuò)增（Rubicon PicoPLEX WGA Kit單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒）——微陣列基因組雜交——染色體拷貝數(shù)變異分析

詳細(xì)：

首先從受精卵吸取一個(gè)極體或者從受精后第三天的5到10個(gè)胚胎細(xì)胞吸取單細(xì)胞。裂解細(xì)胞后，釋放出來(lái)的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，所得產(chǎn)物標(biāo)記后與含有目標(biāo)基因組的微陣列雜交。分析軟件會(huì)識(shí)別出拷貝數(shù)變異。PicoPLEX全基因組擴(kuò)增技術(shù)具有高穩(wěn)定性和可再現(xiàn)性，已經(jīng)成為PGS的標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增技術(shù)。這一技術(shù)也適用任何單細(xì)胞樣品和皮克級(jí)純化DNA的基因特征分析。

PicoPLEX單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增技術(shù)

包括文庫(kù)構(gòu)建和文庫(kù)擴(kuò)增兩個(gè)步驟。文庫(kù)構(gòu)建（預(yù)擴(kuò)增）階段，設(shè)計(jì)的特殊引物能消除引物之間的雜交，從而提高引物和模板的配對(duì)效率。利用特殊隨機(jī)引物（Quasi-random primer）引發(fā)線性擴(kuò)增進(jìn)行全基因組擴(kuò)增。特別設(shè)計(jì)的隨機(jī)引物（參見(jiàn)US patent 8,206,913）能減少引物二聚體的形成，從而提高引物和模板的配對(duì)效率。

PicoPLEX相比于以往的PCR、MDA、MALBC為基礎(chǔ)的單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增技術(shù)，操作簡(jiǎn)單快速。

PicoPLEX單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增技術(shù)

分兩次擴(kuò)增。*次擴(kuò)增，特殊隨機(jī)引物與基因組DNA結(jié)合，形成莖環(huán)形結(jié)構(gòu)文庫(kù)，第二次擴(kuò)增，只有莖環(huán)形結(jié)構(gòu)的文庫(kù)被擴(kuò)增。

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RB3050 Rubicon PicoPLEX WGA Kit 單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒

PicoPLEX WGA Kit采用技術(shù)，設(shè)計(jì)優(yōu)化用于從單細(xì)胞中擴(kuò)增全基因組DNA。起始樣本量低至單細(xì)胞或6pg基因組DNA。便捷的單管操作流程降低污染節(jié)省時(shí)間。結(jié)果穩(wěn)定性、重復(fù)性好。

PicoPLEX WGA Kit適用array CGH分析和PCR平臺(tái)。PicoPLEX技術(shù)被IVF供應(yīng)商如BlueGnome信賴并用于PGS，BlueGnome CGH也是中國(guó)福利會(huì)和平婦幼保健院所用的PGS平臺(tái)。

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