支原體檢測試劑盒的作用及實驗過程

 　　支原體檢測試劑盒是用于在培養(yǎng)細胞中原位染色檢測支原體或其它原核生物的試劑盒。主要用于檢測培養(yǎng)細胞中是否存在支原體污染。

　　培養(yǎng)細胞中的細菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光學顯微鏡下可見，但支原體污染在光學顯微鏡下不可見，必須通過特定的檢測方法進行檢測。檢測支原體污染的方法有很多種，包括支原體分離培養(yǎng)、支原體特異酶檢測、RT-PCR檢測以及DNA熒光染色檢測。上述檢測方法中，除DNA熒光染色檢測外操作步驟相對比較煩瑣并且所需時間較長。本支原體檢測試劑盒是通過Hoechst染色來檢測支原體的。支原體檢測試劑盒的熒光染色可快速、有效、高靈敏度地檢測支原體污染。

　　細胞培養(yǎng)體系被支原體污染之后，支原體*的代謝酶類會產生支原體*的代謝產物，而真核細胞或細菌不會產生這種代謝產物，因而可以通過檢測這種代謝產物而檢測支原體的存在。如果樣品中含有支原體特異的代謝產物，反應系統(tǒng)(包括樣品、反應孔與反應緩沖液)會產生藍綠色，代謝產物濃度越高，顏色越深。

　　支原體檢測試劑盒儲存條件

　　該試劑盒已滅菌封裝。4-25℃儲存，可達12個月。

　　支原體檢測試劑盒的實驗方法

　　1. 所有操作均在室溫(22-28℃)下進行。

　　2. 打開檢測板，在孔中加入40 μL Reaction Buffe A。

　　3. *個孔加入10 μL陰性對照，其他孔加入10 μL待測樣品或陽性對照。

　　4. 輕輕混勻，室溫孵育5分鐘。

　　5. 所有孔中均加入40 μL Reaction Buffe B。

　　6. 輕輕混勻，室溫孵育4分鐘。

　　7. 每孔加入5μL Stop Solution，輕輕混勻。

　　8. 可在30分鐘內觀察樣品顏色的變化或進行拍照保存：

　　a) 如果待測樣品的顏色深于陰性對照，表明樣品被支原體污染。

　　b) 如果待測樣品的顏色與陰性對照相同，表明樣品沒有支原體污染。

　　如果發(fā)現(xiàn)有支原體污染，建議更換無污染的細胞進行培養(yǎng)。如果有必要去除支原體，可以使用Mycoplasma Removal Agent、cyprofloxacin或BM-Cyclin去除支原體污染。支原體檢測試劑盒如用于六孔板樣品檢測，至少可以檢測100個樣品。